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521 單鏈尿型纖溶酶原激活劑

產(chǎn)品時間:2022-03-04

簡要描述:

NIBSC 95/564 單鏈尿型纖溶酶原激活劑(標(biāo)準(zhǔn)品)每個安瓿含有精確測量的 1ml SCuPA(非 Glyc.)溶液冷凍干燥后的殘留物,該溶液由 50 微克 SCuPA 在 0.01M 磷酸鹽緩沖液 pH7.4 中組成,每毫升含有 5mgs 豬膠原蛋白組分作為穩(wěn)定劑(加夫尼等人 1996 年)。


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單鏈尿型纖溶酶原激活劑 (SCuPA),

(非糖。)

NIBSC 95/564

酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細(xì)胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb
二.甲酰胺解聚法:破碎細(xì)胞同上,然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
三.玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細(xì)胞,將裂解物鋪于乙醇上,然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪,DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。
四.異丙醇沉淀法:基本同1法,僅用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態(tài))
五.表面活性劑快速制備法:用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細(xì)胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。
六.加熱法快速制備:加熱96℃-100℃,五分鐘,然后離心后取上清,可用于PCR反應(yīng)。
七.堿變性快速制備:先用NaOH作用20分鐘,再加HCI中和,離心后取上清,含少量DNA。

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