上世紀(jì)50年代,科研人員已經(jīng)把血清添加到培養(yǎng)基中,并且取得了良好的培養(yǎng)效果,但是由于血清成分十分復(fù)雜,直至今天,血清中的所有成分仍未完quan分析出來(lái),并且血清成分及含量會(huì)隨動(dòng)物性別、年齡、生理?xiàng)l件的不同而發(fā)生改變?,F(xiàn)階段血清中已明確檢測(cè)出含有各種蛋白質(zhì)、多肽、生長(zhǎng)因子、氨基酸、脂類、碳水化合物、無(wú)機(jī)物、維生素等,這些成分為細(xì)胞的正常生長(zhǎng)提供了基本的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
一、血清的分類
血清有多種類型,以牛血清為例,可以劃分為:胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、成牛血清。
胎牛血清取自剖腹產(chǎn)的健康胎牛;
新生牛血清取自出生14h內(nèi)未進(jìn)食的新生牛;
小牛血清取自出生6月齡以內(nèi)的健康小牛(企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn));
成牛血清取自健康的成牛(企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn))。
因胎牛未接觸外界,血清中抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害成分最少,故胎牛血清品質(zhì)高。
二、血清的保存
長(zhǎng)期保存建議存放于-15~-20℃環(huán)境中,若無(wú)法一次性將1瓶中的血清全部使用完畢,建議將血清分裝到一次性能夠用完的小瓶中,再進(jìn)行冷凍保存,避免出現(xiàn)反復(fù)凍融現(xiàn)象。
血清在放入冷凍環(huán)境前,建議瓶中預(yù)留一定的體積空間,避免血清凍結(jié)后體積增大,撐破包裝瓶,形成污染。
三、血清的解凍
血清解凍時(shí),先將血清放在2~8℃的冰箱過(guò)夜,使之部分融解,然后置于室溫條件下使之完quan融解,在融解過(guò)程中需要規(guī)則地?fù)u晃均勻,使血清全部融解。
在做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)前,建議將完quan融解的血清放置在37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,再進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。切勿直接將血清從-15℃放入37℃進(jìn)行解凍,溫度變化太大,會(huì)導(dǎo)致血清中蛋白質(zhì)凝集析出,出現(xiàn)大量沉淀。
四、沉淀處理
血清正常解凍情況下,可能會(huì)出現(xiàn)一些沉淀物,造成這種情況的原因有許多種,但普遍的是由于蛋白質(zhì)變性造成的。通常這些沉淀物質(zhì)不會(huì)影響血清的品質(zhì),如果希望去除這些沉淀物,可以將血清分裝進(jìn)無(wú)菌離心管中,以400g進(jìn)行離心,離心后將上清液加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾即可,不建議以過(guò)濾的方式除去這些沉淀物,因?yàn)樗鼈兛赡軙?huì)堵塞過(guò)濾膜。
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