層析法利用混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)間的差異(溶解度、分子極性、分子大小、分子形狀、吸附能力、分子親合力等),使各組分在支持物上集中分布在不同區(qū)域,借此將各組分分離。
層析法進(jìn)行時(shí)有兩個(gè)相,一個(gè)相稱為固定相,另一相稱為流動(dòng)相。由于各組分所受固定相的阻力和流動(dòng)相的推力影響不同,各組分移動(dòng)速度也各異,從而使各組分得到分離。
層析技術(shù)與待分離混合物中各組分的理化性質(zhì)(分子自然形狀、大小、獲電狀態(tài)、溶解度與選擇性吸附劑或載體物的吸附能力,分配系數(shù)、酸堿環(huán)境、溫度、極性以及分子的親和能力等)有著直接關(guān)系。除此,任何層析技術(shù),均具有兩相條件,造成流動(dòng)相對(duì)固定相作單向相對(duì)運(yùn)動(dòng)。這種流動(dòng)相推動(dòng)樣品中各組分通過固定相向前遷移,其運(yùn)動(dòng)速率與兩相物質(zhì)和被分離物質(zhì)狀態(tài)有關(guān)。由于被分離物各組分中的理化性質(zhì)不同,對(duì)不同的兩組或兩組以上組分,具有不同的作用力,通過吸附一解吸,或離子交換、分子篩效應(yīng)、靜電引力,免疫特異性吸附等,造成各組間生物分子分離、遷移距離不等,最終達(dá)到被測(cè)物的分離、純化的目的。這一技術(shù)的應(yīng)用,不但能分離有機(jī)化合物,還能分離無機(jī)物,更主要的是適合于分離分析生物高分子物質(zhì),其分離范圍廣,適用性強(qiáng)?;瘜W(xué)性穩(wěn)定、靈敏度高,既可純化又可制備,條件簡便。
層析法分類如下:
1.凝膠層析
又稱分子篩過濾或排阻層析等。固定相是多孔凝膠,各組分的分子大小不同,因而在凝膠上受阻滯的程度(移動(dòng)速度)也不同。
優(yōu)點(diǎn):所用凝膠屬于惰性載體,吸附力弱,操作條件溫和,不需要有機(jī)溶劑,對(duì)高分子物質(zhì)有很好的分離效果。
常用的凝膠有Sephadex G(葡聚糖凝膠)系列。凝膠層析可用于脫鹽、分離提純、測(cè)定高分子物質(zhì)的分子量、高分子溶液的濃縮等。
2.離子交換層析
采用具有離子交換性能的物質(zhì)作固定相,利用它與流動(dòng)相中的離子能進(jìn)行可逆交換的性質(zhì)來分離離子型化合物的方法。主要用于分離氨基酸、多肽及蛋白質(zhì),也可用于分離核酸、核苷酸及其他帶電荷的生物分子。
3.高效液相層析
在經(jīng)典液相層析法基礎(chǔ)上,引進(jìn)氣相層析的理論而發(fā)展起來的一項(xiàng)新穎快速的分離技術(shù)。具有分離能力強(qiáng)、測(cè)定靈敏度高、可在室溫下進(jìn)行、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn),對(duì)分離蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、生物堿、類固醇和類脂等尤其有利。根據(jù)流動(dòng)相和固定相相對(duì)極性,高效液相色譜分析可分為正相和反相兩種。
4.親和層析
利用待分離物質(zhì)和它的特異性配體間具有特異的親和力,從而達(dá)到分離的目的。將可親和的一對(duì)分子中的一方以共價(jià)鍵形式與不溶性載體相連作為固定相吸附劑,當(dāng)含混合組分的樣品通過此固定相時(shí),只有和固定相分子有特異親和力的物質(zhì)才能被固定相吸附結(jié)合,無關(guān)組分隨流動(dòng)相流出。親和層析中所用的載體稱為基質(zhì),與基質(zhì)共價(jià)連接的化合物稱配基。具有專一親和力的生物分子對(duì)主要有:
抗原與抗體,DNA與互補(bǔ)DNA或RNA,酶與底物,激素與受體,維生素與特異結(jié)合蛋白,糖蛋白與植物凝集素等。親和層析可用于純化生物大分子、稀釋液的濃縮、不穩(wěn)定蛋白質(zhì)的貯藏、分離核酸等。
地址:東莞市萬江區(qū)大塘電商中心B區(qū)448 傳真: 技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng) 管理登陸 備案號(hào):粵ICP備18148388號(hào) GoogleSitemap
東莞市景源實(shí)驗(yàn)科技有限公司 版權(quán)所有 © 2018.